تعیین هویت گونه های لیشمانیای جدید با استفاده از ژن ITS-rDNA

چکیده مقاله

لیشمانیوز، بیمارىهاى انگلى هستند که توسط انگلهاى تکیاخته از جنس لیشمانیا ایجاد مىشوند. لیشمانیازیس جلدی یکی از مسائل مهم بهداشت و سلامت عمومی در ایران است. تعیین هویت انگل لیشمانیا در انسان، مخزن و ناقل بیماری لیشمانیوز با روش های متداول آزمایشگاهی، ایزوآنزیم، مونوکلونال آنتی بادی و تکثیر بخشی از ژنوم انگل لیشمانیا به روش PCR در ایران متداول است. اما تعیین و تأیید قطعی انگل بدون تعیین توالی بخشی از ژنوم انگل لیشمانیا همواره با شک و تردید مواجه بوده است. این مطالعه به منظور تعیین هویت انگل لیشمانیای جدید و با هدف قرار دادن ژن ITS-rDNA انجام گرفته است. این پژوهش توصیفی و تحلیلی میباشد که در آن 18 نمونه که توسط انستیتوپاستور ایران در اختیار گذاشته شده بود، مورد بررسی قرار گرفته است. در این پژوهش، به منظور تشخیص گونه-های انگل لیشمانیا در ایزوله های انسانی مبتلا به لیشمانیوز جلدی نوع مرطوب ابتدا کشت در محیط دو فازی و سپس استخراج DNA از پروماستیگوت ها به عمل آمد.PCR  استاندارد با تکثیر قطعه ژنی ITS-rDNA انجام شد .

آمپلیکون ها توسط الکتروفورز در ژل آگارز ۱.8٪ مورد بررسی قرار گرفتند سپس باند های محصول PCR بعد ازتوالی یابی با استفاده از نرم افزار های مولکولی گونه لیشمانیا تایید شد. نتایج: با مقایسه نتایج تعیین توالی انگل لیشمانیا  در این مطالعه با موارد ثبت شده در بانک جهانی  ژن در 81 نمونه وجود L. major را آشکار نمود. در ۱ نمونه نیزCrithidia fasciculata و8۱ مورد لیشمانیا ولی بدون نام گونه بودند  و در 2مورد نتیجه PCR منفی بود ودر مورد یک نمونه مورد مشابهی نبود. در پایان مشخص گردید که هدف قرار دادن ژن TSI-rDNA یکی از ابزار مفید ،ممکن و قابل اطمینان برای تشخیص Leishmania است .

ITS-rDNA PCR یکی از بهترین راه ها در شناسایی انواع گونه ها Leishmania می باشد که از دقت و حساسیت بالایی برخوردار است .و این شیوه میتواند بعنوان یک ابزار تشخیصی در آزمایشگاه های مرجع که زیرساختارهای مناسبی برای آنالیز  مولکولی انگل ها و تعیین هویت آن ها دارند ، به کار برده شود

دریافت لینک دانلود مقاله